PCR diagnostika tuberkulózy

Tuberkulóza je špecifická infekcia, jej zameranie môže byť celé roky v ľudských tkanivách a potom sa môže šíriť niekoľko mesiacov. Toto je chronické ochorenie, ktorého optimálne liečebné režimy je ťažké vybrať. Jedným z dôvodov je neskorá diagnóza, keď sa mykobaktérie v ľudskom tele už prispôsobili mnohým liekom.

Aké moderné metódy diagnózy existujú? PCR diagnostika - čo to je? Ako sa robí tento výskum? V akých prípadoch je tuberkulóza diagnostikovaná touto metódou a aká je jej podstata?

Čo je to PCR diagnostika

Je to jedna z najmodernejších metód diagnostiky nielen chorôb, ale aj detekcie biologického materiálu. PCR diagnostika bola vynájdená relatívne nedávno. Asi pred 30 rokmi v roku 1983 americký biochemik Carey Banks Mullis navrhol komplexnú schému obnovy biologického materiálu mikroorganizmov v jednom krátkom segmente. Vďaka jeho objavu získal vedec najvyššie ocenenie - Nobelovu cenu.

Čo je to - PCR diagnostika infekcií? Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je diagnóza detekcie vírusových ochorení na základe metód genetického inžinierstva. Je široko používaný v lekárskej mikrobiológii, imunológii a virologii. Metóda je univerzálna a pomáha diagnostikovať malé množstvo materiálu. Infekcia môže byť zistená doslova v prvých hodinách infekcie, dlho predtým, než sa objavia prvé príznaky ochorenia.

Metóda spočíva v získaní z materiálu chorého nie samotného patogénu, ale fragmentov genómu (častíc DNA), jeho biosyntézy s následným určením, do ktorej triedy mikroorganizmov získaný genetický materiál patrí pomocou molekulárno-genetických metód.

Napriek tomu, že ide o komplexný proces, trvá oveľa menej času, než mnohé biologické metódy detekcie infekčných agens. V priebehu niekoľkých hodín je možné pomocou PCR zistiť mikroorganizmus. Na to nie je potrebné izolovať ho od životného prostredia (krv, cerebrospinálna tekutina, sputum) a dlho ho pestovať na umelých živných médiách. Stačí, že v študovanom materiáli je prítomný malý fragment DNA vlákna infekčného činidla.

Základom reakcie je možnosť umelých podmienok (in vitro) vytvoriť syntézu molekúl nukleovej kyseliny infekčného agens.

Čo je potrebné pre PCR?

  1. Priméry sú segmenty DNA, z ktorých začína biosyntéza alebo tvorba.
  2. Nukleotidy alebo komplexné zlúčeniny, ktoré sú základom molekuly DNA alebo RNA.
  3. Polymerázová reťazová reakcia nie je možná bez prítomnosti polymerázy, čo je enzým urýchľujúci PCR.

Fázy diagnostiky PCR

Ako sa vykonáva molekulárna diagnostika pomocou PCR? Postup je jednoduchý a trvá krátky čas, berúc do úvahy zber materiálu.

  1. Pred začatím štúdie si vezmú potrebný biologický materiál - to je voda priedušiek, krv, obsah žalúdka, spúta. Typ biologického materiálu závisí od podozrivého patogénu.
  2. Denaturácia alebo deštrukcia primárnej štruktúry DNA, ktorá sa skladá z dvoch reťazcov. Podstatou tejto fázy je oddelenie dvoch okruhov pod vplyvom vysokej teploty (maximum je 98 ° C, ktoré trvá maximálne dve minúty).
  3. V ďalšom štádiu PCR, nazývanom annealing, sa teplota zníži o niekoľko stupňov, takže primér sa bude viazať na DNA vlákno.
  4. Predĺženie, počas ktorého prebieha syntéza požadovaných molekúl priamo.

Výsledkom je, že iba 25 - 30 takýchto cyklov dostáva potrebný počet kópií DNA mikroorganizmu, ktoré sa ľahko rozpoznávajú.

Vyžaduje PCR diagnostiku tuberkulózy?

Nie je možné, aby všetci ľudia s podozrením na tuberkulózu vykonali PCR, pretože metóda vyžaduje drahé vybavenie. Nie všetky verejné kliniky si to môžu dovoliť kúpiť. Okrem toho sa tak stalo, že obvyklé metódy diagnostikovania infekcie sa vo väčšine prípadov opodstatňujú.

Patrí medzi ne:

  • Prieskum pacientov, história;
  • úplné preskúmanie osoby;
  • štúdia s použitím tuberkulínového testu Mantoux;
  • rádiografia alebo fluorografia;
  • počítačová diagnostika v prípade potreby;
  • mikrobiologické výskumné metódy: mikroskopická analýza a bakteriologické vyšetrenie spúta.

PCR pre tuberkulózu sa vykonáva v osobitných prípadoch, keď je ťažké stanoviť diagnózu alebo nie je možné vykonať iné inštrumentálne metódy.

Napriek množstvu diagnostických metód rastie výskyt tuberkulózy. V súčasnosti nie je len jej rast, ale aj ďalšie funkcie:

  • choroba sa často vyskytuje v ťažkej forme;
  • počet smrteľných prípadov sa zvyšuje;
  • sú stále odolnejšie voči modernej chemoterapii, sú diagnostikované formy ochorenia.

Neochota samotných ľudí každoročne podstúpiť rutinné lekárske vyšetrenia, odmietnutie očkovania vedie k šíreniu tuberkulózy. V takýchto podmienkach potrebujeme rýchle, informatívne a účinné výskumné metódy, ktoré by mali byť prístupné deťom a dospelým. Všetky vyššie uvedené diagnostické metódy sú oveľa horšie ako PCR.

Výhody diagnostiky tuberkulózy pomocou PCR

Tento výskum, aj keď nový, sa osvedčil, najmä v kontroverzných prípadoch, kde nie je možné stanoviť diagnózu z viacerých dôvodov.

Vďaka PCR je oveľa ľahšie odhaliť pôvodcu tuberkulózy v testovanom materiáli.

Výhody PCR diagnostiky sú nasledujúce.

  1. Toto je rýchla analýza. Malý fragment molekuly DNA sa môže použiť na diagnostiku v priebehu niekoľkých hodín (asi päť), čo sa úspešne používa v núdzových situáciách, keď napríklad pred operáciou je potrebné určiť, či je osoba chorá na tuberkulózu.
  2. PCR analýza je povolená v prípade, keď sú iné metódy nedostupné alebo zakázané (na detekciu pľúcnej tuberkulózy, niekedy musíte mať niekoľko rádiologických snímok, čo bude veľká dávka ožarovania).
  3. Pomocou PCR sa vyšetruje prítomnosť akéhokoľvek biologického prostredia na prítomnosť pôvodcu. Napríklad môžete vykonať štúdiu mozgovomiechového moku, ak existuje podozrenie na tuberkulóznu meningitídu.
  4. Povolená PCR diagnostika infekčných ochorení u detí, pretože metóda je bezpečná.
  5. Umožňuje identifikovať patogén v ktoromkoľvek štádiu ochorenia.
  6. Vysoká citlivosť PCR umožňuje detekciu Mycobacterium tuberculosis, aj keď je v biologickom materiále len niekoľko mikroorganizmov.
  7. Je dobré vykonať diagnózu recidívy ochorenia.

Po tom všetkom čítaná PCR sa zdá byť takmer dokonalou diagnostickou metódou, ktorá by mala spôsobiť podozrenie z tuberkulózy. Existujú však aj nevýhody, ktoré treba brať do úvahy.

Nevýhody PCR v diagnostike tuberkulózy

V našej dobe sú takéto diagnostiky zriedkavejšie ako pravidelnosť. A na to je dôvod.

  1. Ide o nákladnú metódu výskumu. Na mnohých klinikách chýba zariadenie pre PCR kvôli jeho vysokým nákladom, ale analýza môže byť stále vykonaná v platených laboratóriách.
  2. Ihneď po ošetrení sa v ľudskom tele môžu stále nachádzať mŕtve mykobaktérie alebo žijúce v malých množstvách (výsledok bude pozitívny počas diagnostiky PCR), takže metóda bude v tomto čase nespoľahlivá, nemá zmysel ju vykonávať.
  3. Výsledkom mutácií mykobaktérií je neúčinná PCR - nie je možné syntetizovať normálnu sekvenciu DNA reťazca.
  4. Je potrebné vybrať správne prostredie pre štúdiu, krv sa odoberá len vtedy, ak je podozrenie, že je infikovaná (sepsa), nie je potrebné brať spúta, ak existuje otázka tuberkulózy orgánov nervového systému. V tomto prípade PCR nebude schopná detegovať patogén a diagnóza bude neinformatívna.

Indikácie na detekciu tuberkulózy pomocou PCR analýzy

PCR diagnostika tuberkulózy sa vykonáva najčastejšie v kontroverzných prípadoch. Kedy lekári odkazujú na túto štúdiu?

  1. Ak je ťažké stanoviť diagnózu pomocou obvyklých metód, ale bol tu kontakt s pacientom s tuberkulózou.
  2. V prípade, že nie je možné osobu na kliniku podrobiť rutinným rutinným testom na tuberkulózu, je ľahšie ju vyšetriť pomocou PCR, pretože spúta na test sa môže podať v nádobe a diagnóza sa potvrdí v priebehu niekoľkých hodín.
  3. Ak má osoba núdzovú operáciu a je naliehavé zistiť, či je chorý na tuberkulózu.
  4. Ak je to potrebné, tehotná žena je tiež lepšie skúmať na tuberkulózu pomocou PCR, pretože metóda je bezpečná.
  5. Každý, kto nebol diagnostikovaný s tuberkulózou, bol na základe platenia potvrdený bakteriologickými metódami a fluoroskopiou. Toto sa stane, keď je lézia v pľúcach v priamom obraze nepostrehnuteľná a osoba počas dodania spúta na štúdiu nemohla nasledovať odporúčania pre správny zber materiálu. V tomto prípade sa osoba obáva všetkých príznakov charakteristických pre pľúcnu tuberkulózu.
  6. Keď existujú pochybnosti o výsledkoch testu Mantoux.
  7. U detí je vhodnejšie urobiť PCR diagnostiku tuberkulózy. Tento postup je bezpečný, nevytvára ďalšie ožarovanie a je účinný pri odhaľovaní ťažko diagnostikovateľných foriem ochorenia.

Včasná diagnostika tuberkulózy je kľúčom k správne predpísanej liečbe a zníženiu šírenia choroby. Známe metódy detekcie chorôb nie sú vždy účinné. Preto je dnes PCR jedným z najspoľahlivejších a najbezpečnejších spôsobov detekcie infekcie v ranom štádiu jej vývoja.

PCR analýza pre diagnostiku tuberkulózy

Medicína nikdy nezostala stáť a pokroky v zdravotníctve umožňujú diagnostikovať a liečiť mnoho predtým nepostihnutých ochorení. Existujú aj choroby, ktoré sa nedajú zistiť vizuálnou kontrolou. Medzi nimi bola vždy tuberkulóza. Je to nebezpečné infekčné ochorenie, ktoré postihuje pľúca, kĺby a kosti a často vedie k smrti aj v našich dňoch. Diagnostické metódy pre toto ochorenie sa zlepšili, čo umožňuje odhaliť chorobu v skorších štádiách, keď je liečiteľná. Medzi nimi nie sú len röntgenové a Mantoux testy, ale aj PCR na tuberkulózu.

Tuberkulóza - čo to je

Predtým sa tuberkulóza nazývala suchá choroba alebo fytóza. Ide o bakteriálnu infekciu, ktorá najčastejšie postihuje pľúca. Jeho extrapulmonálne formy - tuberkulóza kostí a kĺbov, tuberkulózna meningitída - sú menej časté a pokročilejšie štádiá. Príčinou tohto infekčného ochorenia sú mykobaktérie. Tuberkulóza bacillus je tiež nazývaný Koch prútik.

TBC infekcia je veľmi nákazlivá, prenášajú sa vzduchovými kvapkami pri kašli a kýchaní pacienta. Jedinou ochranou proti tomuto ochoreniu je včasná vakcína. Nechráni pred infekciou, ale neumožňuje bacilom vstúpiť do tela, aby spôsobili tuberkulózu.

Formy tuberkulózy

Ochorenie sa môže vyskytovať v otvorenej aj uzavretej forme. Rozdiely sú nasledovné:

  • uzavretá tuberkulóza je asymptomatická. Za takýchto okolností nie je možné Kochov prútik v spúte zistiť, preto infikovaný nie je nebezpečný pre životné prostredie. Takýto priebeh ochorenia zvyčajne neohrozuje najviac nakazených, ale existujú výnimky - v jednom prípade desiatich je uzavretá tuberkulóza schopná ísť do otvorenej formy;
  • s otvorenou formou sa mykobaktérie, ktoré spôsobujú tuberkulózu, nachádzajú v slinách a spúte pacienta. Infikovaný organizmus predstavuje veľké nebezpečenstvo pre spoločnosť, dokonca aj v izolácii. Toto ochorenie spravidla postihuje pľúca. Ak nie je diagnostikovaná včas, môže mať iné formy, ako je tuberkulóza kostí alebo kĺbov.

Otvorená forma tuberkulózy sa diagnostikuje rôznymi spôsobmi. Pacient podstúpil RTG hrudníka alebo RTG hrudníka, analýzy jeho biologického materiálu alebo kožného testu Mantoux. Nedávno sa objavila iná metóda, ktorá sa považuje za rovnako účinnú - analýzu polymerázovej reťazovej reakcie (PCR).

Čo znamená PCR

V lekárskej praxi sa už dlho používajú metódy diagnostiky tohto alebo tohto ochorenia detekciou jeho DNA alebo RNA v ľudskom tele. To je presne PCR pre tuberkulózu. Jedná sa o veľmi presnú analýzu krvi alebo inej biologickej tekutiny, ktorá vám umožní identifikovať baktérie s minimálnou koncentráciou vo vybranom materiáli, stačí jedna bunka. Štúdia sa uskutočňuje pomocou špeciálneho enzýmu polymerázy.

Výhody metódy

PCR je diagnostická metóda, ktorá sa ukázala na najlepšej strane, takže sa používa pomerne často, v kombinácii s inými metódami a nezávisle. Jeho výhody:

  • najkratších výrobných podmienok. Štúdia sa uskutočňuje rýchlo, asi za 5 hodín pomocou PCR môže detegovať prítomnosť tuberkulózy v biologickej tekutine pacienta. Platí to najmä vtedy, ak potrebujete vykonať okamžitý chirurgický zákrok a predtým, než dostanete presnú diagnózu;
  • Stáva sa, že iné diagnostické metódy sú pre pacienta kontraindikované. Napríklad, röntgenové žiarenie sa nedá robiť v žiadnom prípade pre každého. Okrem toho, obraz nie je vždy možné urobiť diagnózu, najmä ak je choroba v ranom štádiu. Pomocou metódy PCR sa okamžite deteguje patogén;
  • Na analýzu je vhodná akákoľvek biologická tekutina pacienta. Na identifikáciu pľúcnych a extrapulmonárnych foriem sa vykonáva PCR moču a slín na tuberkulózu. Štúdia sa tiež vykonáva s použitím miechy pacienta na zistenie tuberkulóznej meningitídy.
  • Metóda je absolútne bezpečná. Na jeho vykonanie stačí, aby ste získali biologickú tekutinu od pacienta. PCR diagnostika tuberkulózy u detí je pohodlná a neškodná, pretože röntgenové vyšetrenie je povolené len vo veku 18 rokov a Mantoux test niekedy spôsobuje nežiaduce reakcie;
  • PCR je vysoko citlivá analýza. To vám umožní identifikovať Koch palice s minimálnou koncentráciou mykobaktérií;
  • S pomocou špeciálneho enzýmu polymerázy sa ochorenie diagnostikuje v ktoromkoľvek štádiu, od skorého až po pokročilý;
  • tento spôsob je účinný pri diagnostike opätovného výskytu ochorenia;
  • Táto metóda je prielom v presných diagnózach v skorých štádiách ochorenia. To vám umožňuje začať liečbu v čo najkratšom čase a zničiť patogény, keď ešte nemali nezvratný negatívny vplyv na orgány a systémy ľudského tela.

Kde robiť PCR analýzu tuberkulózy

Hoci PCR analýza tuberkulózy je vysoko účinnou metódou na diagnostiku tohto ochorenia, zriedka sa používa samostatne. Ide spravidla o dodatočnú metódu detekcie tuberkulózy, ktorá sa používa zriedkavo. Faktom je, že táto metóda je dosť drahá.

Verejné kliniky nemajú možnosť kúpiť špeciálne vybavenie na vykonávanie analýzy PCR a vláda nevidí dôvod na financovanie tohto článku, pretože tuberkulózu možno diagnostikovať inými spôsobmi. Takáto štúdia sa najčastejšie vykonáva na súkromných klinikách, ktoré si môžu dovoliť kúpiť potrebné vybavenie.

Nevýhody metódy

Vysoká cena nie je jedinou nevýhodou PCR. Okrem vysokých nákladov má táto metóda ďalšie nevýhody a nedostatky, napríklad:

  • PCR na tuberkulózu poskytuje pozitívny výsledok aj po liečbe, pretože odoberá odumreté bunky ako živé baktérie, preto táto metóda nie je vhodná ako kontrolné vyšetrenie pacienta na potvrdenie jeho zotavenia;
  • mutácia tuberkulózy bacilli a ich DNA je modifikovaná, čo môže ovplyvniť spoľahlivosť výsledku;
  • PCR krvný test na tuberkulózu sa vykonáva zriedkavo, pretože prítomnosť Kochových tyčiniek v týchto biologických tekutinách je extrémne ťažké zistiť. To je možné len v posledných štádiách alebo v sepsi. Zvyčajne sa pacientovi odoberie spútum na diagnostiku;

Stojí za zmienku, že najpresnejší výsledok je presne zber obsahu žalúdka pacienta. Ak je podozrenie na pľúcnu tuberkulózu, kultúra spúta bude najúčinnejším spôsobom diagnostiky ochorenia. Ak má pacient extrapulmonálnu formu, potom v tomto bioenvironmente nemusia byť žiadne baktérie. Na stanovenie tuberkulózy kostí, kĺbov atď. Pomocou PCR je potrebná ďalšia biologická tekutina, napríklad miechová tekutina.

Ako je PCR na tuberkulózu

Ako bolo opísané vyššie, podstatou PCR analýzy je identifikácia patogénnej DNA v biologickej tekutine pacienta polymerázovou reakciou. Hlavné fázy metódy:

  1. Odber vzoriek biologických materiálov. PCR nie je len hemotest - študovaná biomasa môže byť sliny, moč, cerebrospinálna tekutina, bronchiálna umývacia tekutina, obsah žalúdka, spúta.
  2. Potom je biomasa vystavená vysokým teplotám, aby sa zničila štruktúra DNA patogénu.
  3. Potom sa teplota postupne znižuje a na zničený element DNA je pripojený primér.
  4. Podľa výsledkov molekulárnej syntézy, ktorá trvá približne 30 cyklov, je detekovaný kmeň určitej patogénnej baktérie alebo jej neprítomnosť.

Táto analýza vyžaduje dobré financovanie, takže PCR sa nerobí veľmi často. Táto metóda však nie je rovnaká, ak sú iné diagnostické možnosti zakázané, alebo v prípade núdze, keď nie je čas čakať na výsledok.

Zhrnutie

Na záver môžeme vyvodiť tieto závery: t

  • PCR je vysoko presná analýza, ktorá dokáže detekovať tuberkulózu niekoľko dní po infekcii;
  • táto analýza je vykonaná za 3,5 - 5 hodín, takže v prípade, že návrh zákona ide do hodín, je nenahraditeľný;
  • je to bezpečná metóda, ktorá nemá žiadne vedľajšie účinky;
  • Používa sa, keď iné diagnostické metódy ukázali nekonzistentné výsledky alebo ich použitie je kontraindikované.

PCR sa však vykonáva zriedka, pretože ide o nákladnú analýzu, ktorá vyžaduje inštaláciu špeciálneho zariadenia. Okrem toho nie je vždy informatívne, takže odborníci používajú túto metódu na detekciu tuberkulózy ako ďalšiu.

Metódy na testovanie krvi na tuberkulózu PCR

Príčinným činiteľom tuberkulózy je mykobaktéria nazývaná bacil tuberkulózy alebo Kochov bacil. Akonáhle sa v ľudskom tele, nemusí sa prejaví na dlhú dobu. Postupom času, keď nastanú priaznivé podmienky, baktéria môže spôsobiť pľúcnu tuberkulózu alebo iné orgány.

S cieľom úspešne bojovať proti tejto chorobe je veľmi dôležité diagnostikovať ju v ranom štádiu. Krvný test na tuberkulózu pomocou PCR je najúčinnejším a najrýchlejším spôsobom diagnostiky tuberkulózy. Vedenie trvá štyri hodiny. Je to pohodlnejšie ako iné metódy, má menej kontraindikácií a takmer 100% presnosť.

Čo je PCR krvný test?

Dnes je PCR analýza jednou z najnovších metód diagnostiky rôznych ochorení tela. Na zistenie tuberkulózy je táto metóda najúčinnejšia v porovnaní s inými doteraz používanými metódami. Metóda bola objavená v roku 1983 slávnym chemikom K. Mulllisom, ktorý za neho dostal Nobelovu cenu o desať rokov neskôr.

Základom tejto metódy je polymerázová reťazová reakcia, ktorá umožňuje určiť nielen prítomnosť patogénu v krvi, ale aj jeho vzhľad. Na tento účel sa pomocou metódy PCR deteguje časť DNA patogénu a vykoná sa jej identifikácia. Aj keď v krvi existuje niekoľko rôznych patogénov, táto technika vám umožňuje zistiť ich všetky.

Ak je podozrenie na bacil tuberkulózy, pacientovi sa predpisuje krvná skúška PCR na tuberkulózu, ale nie je detekovaná inými metódami.

Ak je to žiaduce, každý môže túto analýzu odovzdať sám, kontaktovať kliniku, kde sa vykonáva, napríklad INVITRO. Je to jedna z najväčších súkromných spoločností s lekárskymi laboratóriami v mnohých krajinách.

Je táto metóda účinná pri diagnostike tuberkulózy?

V súčasnosti neexistuje presnejšia analýza na identifikáciu Kochových tyčiniek v tele pacienta. Účinný je úplný krvný obraz, ale umožňuje získať pozitívny alebo negatívny výsledok až po dostatočne dlhom čase. Na tento účel sa materiál, ktorý je predmetom štúdie, vyseje na živné médium a až po niekoľkých týždňoch je jasné, či sa baktérie množia.

Metóda PCR umožňuje detekciu DNA baktérií v priebehu niekoľkých hodín, čo je veľké plus pre diagnostiku. Okrem toho analýza umožňuje presne identifikovať baktériu, aj keď je v krvi veľmi malá.

Kontraindikácie metódy

Táto výskumná metóda nemá takmer žiadne kontraindikácie. Vzhľadom na to, že krv sa používa, stav pacienta nezáleží. Prítomnosť prechladnutia nemá vplyv na výsledok analýzy.

Neodporúča sa vykonávať ju po očkovaní, ako aj po nedávnej liečbe. Je to spôsobené tým, že telo ešte nie je očistené a zvyšky baktérií môžu ovplyvniť výsledok.

Výhody analýzy

Krvný test PCR na tuberkulózu má niekoľko výhod oproti iným metódam vyšetrenia, ako je Mantoux test alebo X-ray. Medzi nimi sú nasledovné vlastnosti:

  1. Rýchlosť vykonávania. V porovnaní s inými PCR analýzami vykonanými za niekoľko hodín.
  2. Pre tento postup môžete použiť nielen krv, ale aj iné biologické sekréty tela.
  3. Procedúra nemá žiadne kontraindikácie, môže byť vykonaná nielen pre dospelých, ale aj pre deti. Vhodné aj pre tehotné ženy bez poškodenia ich zdravia.
  4. Metóda umožňuje detekciu infekcie krvi baktériami v prvých štádiách, keď nie sú žiadne vonkajšie príznaky ochorenia.
  5. Táto technika umožňuje identifikovať patogén s najmenšími množstvami baktérií v materiáli.
  6. Dáva dobrý účinok v štúdii pacienta, znovu infikovaného.
  7. Analýzu možno vykonať bez ohľadu na to, ako sa pacient cíti. Napríklad reakcia Mantoux sa vykonáva, ak pacient nemá nachladnutie a horúčku. V tomto prípade takéto obmedzenia neexistujú.

Ako je zrejmé z uvedeného zoznamu, táto diagnostická metóda je oveľa výhodnejšia ako iné. Je úplne neškodný pre alergických pacientov. Môže ju úspešne používať dospelí aj deti. Táto technika vám umožní ušetriť čas na diagnostiku a začať liečbu rýchlejšie.

Metóda je vhodná aj pre ľudí z provincie, kde nie sú žiadne príslušné laboratóriá. Nemusia prísť niekoľkokrát na kliniku, jeden deň postačuje na to, aby sa lekár dostal k výsledkom testov a predpisovania liečby.

PCR krvný test Nevýhody

Okrem výhod má táto metóda množstvo nevýhod, ktoré môžu byť prekážkou pri vykonávaní analýzy PCR:

  1. Relatívne vysoké náklady na postup. Vykonanie takejto analýzy si vyžaduje drahé vybavenie a nie každá klinika si to môže dovoliť. Je vo veľkých laboratóriách súkromných spoločností. Ceny tam sú spravidla vždy vysoké.
  2. Analýza poskytuje správny výsledok len vtedy, ak je materiál pre štúdiu správne vybraný. Napríklad pri tuberkulóze genitourinárneho systému krvný test nepreukáže prítomnosť ochorenia. V tomto prípade je potrebné zbierať moč alebo výtok z močových orgánov.
  3. Metóda nie vždy dáva presný výsledok u detí. Je to spôsobené vplyvom očkovania. Napríklad po očkovaní BCG sa táto analýza neodporúča.
  4. Existuje možnosť získať falošne pozitívny alebo falošne negatívny výsledok. Čo je to? Metóda má veľmi vysokú citlivosť. Pri zbere materiálu treba rešpektovať zvýšenú sterilitu. Ak materiál dostane najmenší počet cudzích baktérií, analýza sa poškodí, výsledok bude skreslený.

Napriek nedostatkom je metóda široko používaná. Napríklad v prípadoch, keď je potrebné urgentne určiť chorobu u pacienta. Môže byť predpísané pre tehotné ženy, ak majú podozrenie na infekciu, ktorá by mohla ohroziť dieťa alebo matku. Niekedy predpísané pre deti pred nástupom do materskej školy. Ale to je na žiadosť rodičov.

Príprava postupu

Pred vykonaním analýzy musí pacient vykonať prípravné činnosti. Závisia od toho, aký materiál sa vzdá:

  1. Ak je potrebné darovať krv, mala by sa pripraviť sterilná skúmavka. Antikoagulant sa pridáva k nemu - špeciálny roztok, ktorý zabraňuje zrážaniu krvi. Zozbieraný materiál sa vloží a jemne sa premieša. Krv sa odoberá jednorazovou injekčnou striekačkou zo žily.
  2. Procedúra sa vykonáva ráno nalačno. Krv sa uchováva v chladničke maximálne päť hodín. Ak toto pravidlo ignorujete, výsledky analýzy môžu byť nepresné.
  3. Týždeň pred dodaním biomateriálu by malo prestať užívať akékoľvek lieky.
  4. Po užití alkoholických nápojov nemôžete darovať krv.
  5. V prítomnosti chronických infekčných alebo zápalových ochorení sa postup odloží, kým sa osoba úplne neobnoví.

Počas procedúry je potrebné dodržiavať maximálnu sterilitu. Preto je dôležité absolvovať testy len na osvedčených klinikách pod vedením skúseného špecialistu. Je potrebné pripomenúť, že minimálny vstup cudzích mikroorganizmov môže spôsobiť nesprávny výsledok. Aby sa tomu zabránilo, môže lekár nariadiť opätovné vyšetrenie.

Ako sa odoberá krv pomocou PCR?

Na darovanie krvi na analýzu nesmie pacient konzumovať viac ako šesť hodín. Najlepšie je podstúpiť zákrok ráno na lačný žalúdok. Krv sa odoberá z kocky žily cez jednorazovú ihlu do sterilnej skúmavky. Antikoagulant sa podáva injekčne tak, aby sa krv nezrážala. Obsah skúmavky sa musí starostlivo premiešať, aby sa zabránilo náhlym pohybom.

Ak bola krv odobratá mimo laboratória, mala by byť okamžite doručená technikovi. Na testovanie tuberkulózy by sa mala uchovávať najviac päť hodín. Po tomto čase môže byť výsledok nepresný. Odber materiálu mimo laboratória je povolený len vtedy, ak pacient nemôže prísť do nemocnice zo zdravotných dôvodov. Napríklad si ľahne a nie je možné si prenajať vhodnú dopravu.

Výsledky dekódovania

Výsledok PCR môže byť buď pozitívny alebo negatívny. Pozitívny znamená prítomnosť baktérií v tele. Negatív indikuje, že chýba. Hoci nie vždy pozitívny výsledok hovorí o tuberkulóze. Môže to byť chybné, takže na potvrdenie diagnózy sú potrebné ďalšie diagnostické testy.

Všetky ostatné informácie sú pre vnímanie pacienta ťažké a sú zapojené do špecialistu. V prípade pozitívneho výsledku lekár predpíše potrebnú liečbu.

Náklady na testy v rôznych centrách

Cena konania sa môže líšiť v závislosti od zdravotného strediska, v ktorom sa vykonáva. Podrobnosti nájdete v nižšie uvedenej tabuľke.

Detekcia tuberkulózy pomocou PCR

Cez obrovské úspechy v oblasti medicíny, ľudstvo stále nemôže plne kontrolovať také nebezpečné ochorenie ako tuberkulóza. V boji proti tejto infekcii sa zlepšili diagnostické metódy, očkovanie a metódy liečby. Ale tuberkulóza je stále často smrteľná. Môžete sa chrániť pred hroznou infekciou, ak budete viesť zdravý životný štýl, vykonávať bežné očkovanie a pravidelné vyšetrovanie. Iba včasná diagnóza pomôže v prípade infekcie liečiť sa úplne. Krvný test PCR na tuberkulózu umožňuje čo najskoršiu detekciu Kochovho prútika.

Tuberkulózna infekcia

Tuberkulóza (zastaraný názov konzumácie) je infekčná patológia, ktorá najčastejšie postihuje dýchací systém. Mycobacterium tuberculosis sa šíri vzduchom kýchaním a kašľaním infikovanej osoby alebo zvieraťa. Riziko infekcie je tiež slinná tekutina pacienta s tuberkulózou. Po vstupe do tela sa často prítomnosť infekcie neprejavuje, to znamená, že choroba prebieha v latentnej forme.

V závislosti od priebehu ochorenia existujú dve formy infekcie tuberkulózy:

  1. Fakulári považujú uzavretú fázu tuberkulózy za nízkorizikovú alebo vo všeobecnosti nie nebezpečnú z hľadiska infekcie osôb okolo nich. Mykobaktérie v prípade latentnej formy v spúte nie sú detegované dostupnými diagnostickými metódami vrátane analýzy PCR. Tento stav je nebezpečný v tom, že v jednom z desiatich prípadov sa môže premeniť na aktívnu fázu, tj na otvorenú formu tuberkulózy.
  2. Otvorené štádium infekcie tuberkulózy je charakterizované detekciou Kochových tyčiniek v spúte av iných biologických tekutinách tela. Pri tejto forme ochorenia je pacient mimoriadne nebezpečný pre ľudí okolo neho, aj keď sú dodržané hygienické štandardy.

Populárne diagnostické opatrenia na detekciu mykobakteriálnej tuberkulózy zahŕňajú fluorografiu, tomografiu a rádiografiu hrudníka a ďalších postihnutých orgánov. Štúdie rôznych biologických materiálov sa vykonávajú úspešne, ako aj tuberkulínový kožný test alebo Mantoux test. Ale najúčinnejšia molekulárno-genetická analýza polymerázovej reťazovej reakcie, skrátene PCR.

Čo je PCR test na infekciu tuberkulózy?

Polymerázová reťazová reakcia je najpresnejšia molekulárno-genetická diagnostika. PCR analýza infekcie tuberkulózy umožňuje s veľkou istotou detekovať prítomnosť DNA alebo RNA patogénu v skúmanej vzorke krvi alebo v iných biologických tekutinách tela.

Početné výhody diagnostickej metódy PCR zahŕňajú skutočnosť, že na výskum s použitím špeciálneho polymerázového enzýmu môže stačiť len veľmi malý počet baktérií, stačí jedna bunka.

Ďalšie výhody s PCR diagnostikou tuberkulózy:

  • Bezchybná presnosť polymerázovej reťazovej reakcie pri analýze infekcie tuberkulózy sa dosahuje špeciálnym fragmentom súvisiacim so špecifickým patogénom, v tomto prípade mycobacterium tuberculosis.
  • Garancia stopercentného výsledku v dôsledku citlivosti PCR analýzy, ktorá sa pohybuje od desiatich do tisíca buniek v skúmanej vzorke, v biologickom materiáli, aby sa skutočne identifikovala dokonca jediná bunka mykobaktérií tuberkulózy.
  • Najnaliehavejšie prijatie výsledkov prieskumu je len do 3,5 - 5,5 hodín po dátume PCR analýzy Mycobacterium tuberculosis.

Analýza PCR na tuberkulózu je nepochybným prielomom v oblasti včasnej a presnej diagnostiky. Od nástupu molekulárno-genetickej metódy diagnózy je možné detegovať tuberkulózu a ďalšie smrtiace infekcie v najskoršom štádiu, o niekoľko dní neskôr, alebo maximálne niekoľko týždňov po infekcii. Keď patogény práve začínajú útočiť na telo, môžu byť zničené bez následkov pre orgány a systémy ľudského tela.

Mycobacterium tuberculosis má charakteristický znak, ktorý značne komplikuje liečbu tohto ochorenia - schopnosť prispôsobiť sa účinkom liekov na lieky. PCR analýza tuberkulózy umožňuje stanoviť citlivosť mycobacterium tuberculosis na predpísaný liek a tým určiť účinnosť liečby. Pri štúdii PCR na stanovenie rezistencie tuberkulózy mykobaktérií na lieky použite schopnosť génov patogénu „zapamätať“ si imunitu voči konkrétnemu lieku. Výsledok štúdie génov pre rezistenciu na liečivo možno získať do dvoch dní po analýze PCR.

Ako sa PCR metóda vykonáva pri tuberkulóze

Podstatou diagnózy polymerázovou reťazovou reakciou je izolácia DNA patogénu z biologických tekutín pacienta a následná klasifikácia podľa typu mikroorganizmu. Na zistenie patogénu postačuje aj jeho naj mikroskopickejší fragment DNA. Na dlhý zoznam výhod testovania na tuberkulózu prostredníctvom PCR môžete pridať absolútnu jednoduchosť tejto štúdie.

Stupne diagnózy tuberkulózy pomocou polymerázovej reťazovej reakcie:

  • Vzorky krvi, spúta a bronchiálne výplachy sa použijú ako testované vzorky.
  • Ďalej je biologický materiál vystavený vysokým teplotám niekoľko minút a dosahuje až 97 stupňov Celzia. Vzhľadom k tomu, čo je deštrukcia (denaturácia) pôvodnej štruktúry DNA patogénu, pozostávajúci z páru reťazcov.
  • Ďalšou operáciou je žíhanie, pri ktorom sa teplota zníži, aby sa primér mohol pripojiť k jednému z vlákien DNA oddelených počas predchádzajúceho postupu.
  • Posledným stupňom je predĺženie, počas ktorého prebieha biologická syntéza potrebných molekúl.

Získanie požadovaného počtu kópií DNA patogénu, ktoré už možno klasifikovať v závislosti od príslušnosti ku konkrétnemu kmeňu, bude trvať približne 25 - 30 cyklov. Vykonanie štúdie polymerázovou reťazovou reakciou vyžaduje špeciálne drahé zariadenie. Inštalácia takýchto zariadení nie je všade možná.

Preto testy PCR na podozrenie na tuberkulózu nemožno nazvať finančne najprístupnejším. Ale za určitých okolností, keď je každá minúta drahá, kvôli veku alebo niektorým zvláštnostiam organizmu, sú iné diagnostické metódy kontraindikované, analýza PCR nie je rovnaká, pretože je absolútne bezpečná. Diagnóza PCR pre patológiu tuberkulózy je priradená v prípade kontroverznej situácie, ak nie je k dispozícii živý klinický obraz a iné výskumné metódy vykazujú protichodné výsledky.

Účinné je také vyšetrenie krvi alebo iných biologických tekutín v prípade relapsu tuberkulózy.

Okrem neprítomnosti alebo prítomnosti špecifického kmeňa mycobacterium tuberculosis. Pomocou polymerázovej reťazovej reakcie je možné určiť, v akom štádiu je choroba. Treba však mať na pamäti, že ak sa uskutoční analýza PCR u osôb, ktoré podstúpili terapiu tuberkulóznych lézií. Potom malý počet mŕtvych alebo stále v štádiu zabíjania mycobacterium tuberculosis môže zostať v krvi a iných testovaných vzorkách a odpoveď môže byť falošne pozitívna.

PCR analýza na detekciu infekcie tuberkulózou je čiastočným riešením problému, okrem hromadného očkovania, v boji proti úmrtiam v prípade tuberkulózy. Teraz nie je potrebné čakať na detekciu výrečných symptómov alebo objavenie sa ohnisiek, ktoré sú charakteristické pre tuberkulózu v obraze po fluorografii. Pri každom podozrení z možnej infekcie, aby sa úplne odstránili hrozné následky, je vždy príležitosť vykonať analýzu na PCR.

PCR diagnostika tuberkulózy u detí a dospelých: indikácie pre

Svetová zdravotnícka organizácia uznala pred 20 rokmi, že miera šírenia tuberkulózy bola mimo kontroly a dosiahla rozsah epidémie. Odvtedy sa situácia nezlepšila. Každý rok je diagnostikovaných viac ako milión prípadov ochorenia, z ktorých takmer štvrtina je smrteľná. V poslednom desaťročí sa incidencia u detí zvýšila, väčšina foriem ochorenia nie je vhodná na štandardnú liečbu antibiotikami.

Jednou z globálnych úloh medicíny je dnes vývoj takých diagnostických metód, ktoré umožnia identifikovať patológiu pred nástupom výrazných klinických príznakov. Jedným z nich je polymerázová reťazová reakcia (PCR) na tuberkulózu, ktorá pomáha detegovať palice spôsobujúce Kochovu chorobu v krvi, spúte a iných biologických tekutinách.

Diagnóza tuberkulózy

Skríningové testy sú zamerané na detekciu pacientov, nositeľov tuberkulózy a prevenciu šírenia infekcie v spoločnosti. Pre deti mladšie ako 14 rokov sa masívne používa test Mantoux. Ide o imunologický test, pri ktorom sa dávka tuberkulínu podáva subkutánne - komplexná zmes genetického materiálu niekoľkých typov mykobaktérií. Výskyt výraznej reakcie indikuje aktívne sa vyskytujúci infekčný proces.

Na preventívne vyšetrenie u dospelých s použitím fluorografie alebo röntgenového žiarenia. Tieto metódy pomáhajú zviditeľniť patologické lézie v pľúcnom tkanive. Spôsobuje však ťažkosti pri diferenciácii tuberkulózy z inej organickej patológie (malígne a benígne neoplazmy, zápalové procesy, parazitické invázie, profesionálne poškodenie pľúc).

Na objasnenie štruktúry a veľkosti patologického zamerania môžu byť potrebné ďalšie inštrumentálne štúdie:

  • cielená rádiografia;
  • počítačová tomografia;
  • zobrazovanie magnetickou rezonanciou.

Metódy diagnostiky tuberkulózy

V prípade pochybných výsledkov a pri určovaní adekvátnej terapie existuje potreba presnejších diagnostických metód, ktoré umožňujú izolovať patogén. Mikroskopické a bakteriologické vyšetrenie spúta sa používa na dlhodobé potvrdenie pľúcnych foriem tuberkulózy.

V posledných rokoch sa výskyt mykobaktérií rôznych orgánov a systémov - obličiek, kostí, čriev, kože - stal častejším. Na identifikáciu týchto foriem tuberkulózy, ultrazvukového vyšetrenia, kultúry moču a výkalov možno použiť endoskopické vyšetrenia.

PCR diagnostika tuberkulózy pomôže potvrdiť prítomnosť Kochových tyčiniek v krvi, ako aj jej citlivosť na určité lieky. Je to vysoko účinný spôsob založený na detekcii bakteriálneho genetického materiálu v rôznych biologických tekutinách.

Špecifickosť a údaje. T

Polymerázová reťazová reakcia je vysoko citlivá mikrobiologická diagnostická metóda, ktorá je založená na princípoch genetického inžinierstva. Na potvrdenie prítomnosti patogénu v biologickom materiále je postačujúce pre neho detegovať jedinečný fragment nukleovej kyseliny. PCR na tuberkulózu môže detekovať baktérie v krvi, spúte, moči.

V súčasnej dobe vyvinuli niekoľko metód analýzy. Medzi najobľúbenejšie patria:

  • PCR v reálnom čase;
  • mikrofluidná technológia;
  • sekvenovanie a pyrosekvenovanie.

PCR v reálnom čase

Laboratóriá najčastejšie používajú polymerázovú reťazovú reakciu v reálnom čase, pretože znižuje počet falošne pozitívnych výsledkov a samotný proces analýzy trvá krátky čas.

Vzhľadom na veľký počet skrytých foriem ochorenia a neúčinnosť štandardných diagnostických metód sa stále viac používa PCR. Účel tejto analýzy je uvedený na:

  • identifikácia podozrivých oblastí na röntgenovom žiarení;
  • pochybné výsledky tuberkulínového testu;
  • nemožnosť vykonávať mikroskopickú a bakteriologickú analýzu spúta u osôb vo vážnom stave;
  • vykonávanie chirurgických zákrokov, ak je potrebné rýchlo zabezpečiť, aby nedošlo k infekcii;
  • neprípustnosť používania fluorografie, röntgenového žiarenia alebo počítačovej tomografie (napríklad u tehotných žien a dojčiacich žien v prípadoch nadmerného ožiarenia);
  • podozrenie na extrapulmonálnu tuberkulózu (odporúča sa použiť nielen krv, ale aj hlien).

PCR diagnostika tuberkulózy sa osvedčila pri vyšetrení detí, kvôli nedostatku dodatočnej expozície a rýchlym výsledkom.

Postup prípravy a analýzy

Špeciálna príprava na krvnú PCR sa nevyžaduje. Aby sa však predišlo komplikáciám pri odbere vzoriek krvi a aby sa získal kvalitný materiál, mali by sa dodržiavať tieto všeobecné pravidlá: t

  • analýza sa má užívať ráno, najskôr 2 hodiny po prebudení;
  • Mal by obmedziť príjem mastných a vyprážaných potravín denne pred odberom krvi;
  • zdržať sa jedenia, čaju a kávy po dobu 8-9 hodín, je povolené piť čistú vodu;
  • Nefajčite aspoň 3-4 hodiny.

V prípade trvalých liekov (hormóny, antikoagulanciá, protizápalové lieky, antibiotiká, riedidlá krvi) by ste o tom mali informovať laboratórneho asistenta.

Po aplikácii spúta by ste si mali dobre čistiť zuby a niekoľkokrát vypláchnuť ústa. Materiál zozbierajte v sterilnej nádobe. Na dosiahnutie lepších výsledkov je možné večerné použitie expektorancia alebo mukolytického činidla.

Samotná diagnóza sa skladá z niekoľkých štádií.

    Plotový materiál. Môže sa vykonávať v laboratóriu aj na diaľku. Niektoré druhy materiálu, ktoré pacient zbiera nezávisle (moč, hlien).

Deštrukcia štruktúry nukleových kyselín (denaturácia molekúl DNA a RNA). Na tento účel sa testovaný materiál zahreje na teplotu 98 ° C a udržiava sa niekoľko minút. Výsledkom je, že sa dvojitá špirála odvíja, vytvárajú sa jednovláknové molekuly.

  • Vtip. Po pridaní primeru (krátka časť nukleovej kyseliny) teplota klesne o niekoľko stupňov, polymeráza sa aktivuje.
  • Elognatsiya. Teplota sa privedie na optimálnu úroveň, enzýmová aktivita dosiahne maximum a druhý reťazec sa dokončí v súlade s Chargaffovým pravidlom komplementarity.
  • Na dokončenie štúdie je potrebné syntetizovať požadovaný počet molekúl DNA - asi 50 cyklov vyššie uvedenej reakcie. Trvá asi 2-3 hodiny. Pozitívny výsledok reakcie neznamená vždy aktívne štádium ochorenia, ale je indikátorom prítomnosti mikroorganizmu v tele.

    Výhody a nevýhody metódy

    V porovnaní s inými mikrobiologickými metódami, PCR nepotrvá dlho, kým deteguje Mycobacterium tuberculosis pomocou PCR, výsledok možno získať v deň testovania.

    Ďalšou výhodou je vysoká špecifickosť analýzy, ktorá umožňuje detekciu prítomnosti patogénu s presnosťou 90-95% v takmer akomkoľvek biomateriáli (krv, moč, výkaly, cerebrospinálna tekutina, spútum, návaly bronchov).

    Existuje však niekoľko nevýhod metódy:

    • pomerne vysoké percento falošne pozitívnych výsledkov (až 15%), čo súvisí s detekciou neživých mikroorganizmov;
    • v niektorých prípadoch môžete túto chorobu vynechať, pretože Mycobacterium tuberculosis sa často podrobuje mutáciám a zmenám genetického materiálu;
    • nízka účinnosť pri vyšetrení ľudí s imunodeficienciou;
    • vysoké náklady na výskum, potreba drahých zariadení a činidiel.

    Čo možno nahradiť?

    Vzhľadom na rozmanitosť foriem infekcie tuberkulózy je pre presnejšiu diagnózu a voľbu liečby potrebné kombinovať niekoľko diagnostických štúdií:

      Povinná analýza pre deti je Mantoux test. Ak sa zavedenie tuberkulínu (genetický materiál mykobaktérií) prejaví výraznou reakciou, možno predpokladať infekciu tuberkulóznym bacilom.

    Na vizualizáciu patologického zamerania sa môžu použiť röntgenové metódy. Pri diagnostike extrapulmonálnej tuberkulózy sa pri súčasnej biopsii používajú endoskopické metódy:

    • bronchoskopia pomáha identifikovať lézie hrtanu, priedušnice, priedušiek;
    • kolonoskopia - črevá;
    • cystouretroskopia - orgány močového systému;
    • hysteroskopia - ženské genitálie. Tieto metódy nie sú špecifické, na stanovenie presnej diagnózy by sa mal identifikovať patogén.

    Všeobecné klinické testy pomôžu špecifickejšie určiť stav tela. Vyžaduje sa úplný krvný obraz s leukocytárnym vzorcom.

    Zvýšenie počtu neutrofilov so zníženou hladinou lymfocytov a zvýšenie rýchlosti sedimentácie erytrocytov (ESR) indikuje aktívny zápalový proces bakteriálnej etiológie. Vylúčiť poškodenie orgánov močového systému pomocou všeobecnej analýzy moču a kultivácie na sterilitu.

    PCR je v súčasnosti dostupná vo väčšine súkromných laboratórií. To si vyžaduje nielen vysokokvalifikovaných špecialistov, ale aj drahé vybavenie, veľké množstvo reagencií. Použitie tejto metódy je preto napriek vysokej presnosti a špecifickosti obmedzené.

    PCR diagnostika tuberkulózy u detí a dospelých

    Moderné diagnostické metódy (pcr, diaskintest, kvantiferon test) sú vysoko účinné, ale v praxi neboli štúdie overené. Tuberkulínová diagnóza bola základom pre identifikáciu infikovaných a chorých ľudí.

    Metóda umožnila identifikovať veľa chorých ľudí, znížiť štatistiku chorobnosti, úmrtnosti.

    Výskyt mikroskopie mykobaktérií a spúta podľa Zill-Nelson vám umožňuje spoľahlivo diagnostikovať infekciu. Problém spôsobuje presné odobratie spúta priamo z postihnutého priedušku. Na pozadí tuberkulózneho procesu je ovplyvnená významná časť bronchiálneho stromu. Po očkovaní baktériami je možné uskutočniť test citlivosti patogénu na antibiotikum.

    Po analýze výsledku diagnostiky zo strany fiškalizátorov bolo jasné, že nedostatok vylučovania Kochových tyčiniek neznamená, že sa v tele nevyskytuje infekcia. Kauzatívny agens je možné stanoviť po druhom, treťom, štvrtom odbere materiálu.

    Moderné diagnostické metódy (dst, Quantiferon test) detegujú mykobaktérie s aktívnym priebehom ochorenia. V prítomnosti mykobaktérií vo vnútri lymfatických uzlín, s extrapulmonálnymi formami ochorenia, sú testy najčastejšie negatívne.

    Včasná diagnóza je základom prevencie závažných komplikácií a nebezpečných následkov ochorenia.

    Moderné metódy

    Nahradenie klasickej tuberkulínovej diagnózy je diaskintest (dst). Podľa najnovších predpisov by štúdia mala nahradiť štandardný test Mantoux, ktorý umožnil identifikovať mnoho prípadov morbidity a infekcie medzi obyvateľstvom.

    Podstata Diaskintestu, ako aj tuberkulínová diagnóza, zahŕňa subkutánne podávanie proteínov patogénov tuberkulózy. V reakcii na injekciu sa vyvinula reakcia z precitlivenosti so špecifickými zmenami kože: začervenanie, indurácia, tvorba pľuzgierikov.

    Pozitívny výsledok Diaskintestu je typický pre pacientov s aktívnym priebehom ochorenia. V prípade infekcie alebo zvýšenej alergizácie bude štúdia negatívna. Negatívny účinok dst môže byť výsledkom silnej imunity, ale keď je človek infikovaný.

    V porovnaní s Mantu je Diaskintest všestrannejším a citlivejším spôsobom diagnostikovania tuberkulózy. Absencia detekcie infekcie vyžaduje jeho použitie súčasne s tuberkulínovou diagnózou.

    Napriek výsledkom klinických skúšok, vedci tvrdia o všeobecnej univerzálnosti a citlivosti metódy, štúdia sa nemôže považovať za univerzálne diagnostické riešenie.

    Test bol vyvinutý akademikmi zo Sechenov Research Institute. Absencia alergií pri použití diaskintestu sa vysvetľuje subkutánnym podávaním druhovo špecifických proteínov tuberkulózy. Po ich zavedení sa určuje kožná reakcia vo forme sčervenania, tuleňov.

    Čo je kvantiferon test

    Test kvantifikátora sa hodnotí po užití krvi pacienta. Mechanizmom postupu je stanovenie gama-interferónu, ktorý je uvoľňovaný T-lymfocytmi po stretnutí s mykobaktériou tuberkulózou. Testy určujú tuberkulózne proteíny, ktoré obsahujú nielen ľudské a hovädzie baktérie. Test kvantifikátora sa môže tiež použiť na diagnostiku mykobakteriózy spôsobenej inými mykobaktériami, ktoré vytvárajú špecifické zmeny na röntgenovom žiarení. Výsledok testu sa stanoví v niekoľkých skúmavkách, čo zvyšuje diagnostickú citlivosť metódy.

    PCR na diagnostiku detskej tuberkulózy

    Polymerázová reťazová reakcia je presný, ale nákladný spôsob diagnostiky tuberkulózy. PCR sa vykoná po bronchoskopii.

    Po získaní negatívnych výsledkov je racionálne vykonávať polymerázovú reťazovú reakciu. Výsledky sa hodnotia po trojnásobnej kultivácii spúta Mycobacterium tuberculosis. Za najpriaznivejších podmienok identifikácia patogénu indikuje infekciu. Účel chemoprofylaxie sa vyhýba aktívnemu tuberkulóznemu procesu v prítomnosti Kochových tyčiniek.

    Po prijatí kmeňa mikroorganizmu je možné nasadenie na antibiotickú citlivosť. Stanovenie antibiotík, ktoré môžu zabiť mikroorganizmy, nám umožňuje vyhodnotiť, ktoré lieky na liečbu infekcie.

    PCR u detí sa vykonáva s negatívnymi výsledkami očkovania, ale ak sa objaví obrat tuberkulínového testu, vizualizácia RTG príznakov infekcie, detekcia klinických príznakov súčasnej infekcie.

    Polymerázová reťazová reakcia poskytuje vysokú presnosť (asi 99%). Metóda je založená na amplifikácii nukleovej kyseliny. Mykobaktérie, vírusy a iné mikroorganizmy majú jedinečné nukleotidové sekvencie. Ich diagnóza umožňuje identifikovať pôvodcu ochorenia.

    Citlivosť PCR u detí je nižšia ako u dospelých. V praxi sa zistili nasledujúce vlastnosti polymerázovej reťazovej reakcie u dieťaťa:

    1. Špecifickosť - 80-100%;
    2. Citlivosť - 25-80%.

    Napriek vysokej presnosti metódy, získanie negatívneho výsledku neznamená absenciu tuberkulózy u detí. Racionálnejšie použitie metódy u pacientov so stavom imunodeficiencie. V diagnostike extrapulmonálnej tuberkulózy.

    Interpretačné chyby sú určené porušením zhromažďovania a prípravy materiálu pre štúdiu.

    Dôvody negatívneho výsledku PCR v diagnostike tuberkulózy

    Šírenie mykobaktérií v tele lymfatickými (cez lymfatické cievy) a hematogénnymi (cez krvný obeh) zabezpečuje kolonizáciu mnohých tkanív, výskyt extrapulmonálnych ohnísk infekcie.

    Pri stanovení rôntgenových ložísk deštrukcie (deštrukcie) v pľúcach nie je potrebné PCR. U dospelých, s použitím rádiografie, je možné identifikovať pokročilé formy s vysokým stupňom dôvery.

    U detí sa štúdia PCR používa častejšie kvôli latentnej lokalizácii mykobaktérií vo vnútri lymfatických uzlín, čo vedie k negatívnym výsledkom pri použití iných diagnostických metód. Pri bakteriálnej kultúre stačí detegovať približne 10 mikroorganizmov. Treba mať na pamäti, že nie každý je zodpovedný za aktívnu pľúcnu tuberkulózu.

    Pre správnu diagnózu PCR, očkovanie baktérií, by sa mali dodržať požiadavky DST:

    1. Materiál skladujte v sterilných skúmavkách;
    2. Eliminovať vstup iných baktérií;
    3. Pri preprave dodržiavajte osobnú hygienu, aby nedošlo k pádu biomateriálu na telo, tvár a dýchacie cesty.

    Uchovávaná krv spolu s konzervačnou EDTA. Existujú jedinečné vlastnosti prípravy materiálu pre každú laboratórnu analýzu, s ktorou sú odborníci oboznámení.

    Inovatívne diagnostické metódy

    Včasná detekcia infekcie umožňuje včasnú chemoprofylaxiu na prevenciu závažného ochorenia.

    Vymazanie kliniky v detstve, nedostatočné výsledky testov, negramotná interpretácia hodnotenia vzoriek neumožňuje včasné overenie infekcie. Aby sa predišlo chorobnosti dojčiat, je potrebná starostlivá analýza výsledkov s možnosťou stanovenia diagnózy v ranom štádiu.

    Moderná metóda laboratórnej diagnostiky tuberkulózy u detí - detekcia TAB-TM

    Reakcia na stanovenie markera T-buniek u detí nazývaných „TAB-TM“ sa vyznačuje vysokou citlivosťou. Podstata metódy spočíva v identifikácii konkrétneho klastra diferenciácie (CD-27) lokalizovaného na povrchu T-lymfocytov. Po izolácii tohto faktora sa cytokíny zafarbia cytometriou.

    Metóda bola opísaná v literatúre od roku 2014. Výsledky pozorovaní poukazujú na vysokú citlivosť metódy. Stanovenie TAB-TM je expresná metóda na diagnostikovanie tuberkulózy vyšetrením spútom.

    Krvný test na tuberkulózu

    V počiatočnom štádiu dochádza k infekcii tuberkulózy bez špecifických klinických symptómov. Laboratórna diagnóza u detí je možná, keď sa Kochova tyč násobí.

    Aké bunky sa hodnotia v tuberkulóznom procese v laboratórnom krvnom teste:

    1. Červené krvinky sú červené krvinky, ktoré sú zodpovedné za transport kyslíka do tkanív. S ľahkým priebehom pľúcnej tuberkulózy zo strany červeného výhonku krvi nie sú žiadne patologické zmeny. Prítomnosť deštruktívneho zamerania prispieva k krvácaniu s krvnou anémiou. Stav sa vyvíja s tuberkulóznym zápalom črevnej steny. Počet retikulocytov na pozadí patológie sa zvyšuje o viac ako 1%;
    2. Leukocyty sa zvyšujú s akoukoľvek infekciou. Leukocytóza je sprevádzaná posunom leukogramu doľava. Zvýšenie počtu segmentovaných neutrofilov možno sledovať v počiatočnom štádiu. Pri ťažkej tuberkulóze s hnisavou fúziou, stavmi imunodeficiencie sa pozorovala leukopénia (pokles počtu krvných leukocytov). Zároveň zvyšuje obsah lymfocytov (nad 20%);
    3. Eozinofília môže byť sledovaná do počiatočného štádia. K tomuto stavu dochádza, keď tuberkulózne infiltráty rôznych orgánov. Ťažká tuberkulóza s rozpadom u dospelých vedie k úplnej absencii eozinofilov;
    4. Zvýšenie bazofilu.

    Laboratórne testy na tuberkulózu nie sú špecifické pre deti ani dospelých. Takéto zmeny sú charakteristické pre mnohé bakteriálne alebo vírusové infekcie.

    Hemogramové indikátory poskytujú záujem špecialistom TB na určenie štádia infekcie tuberkulózy.

    Pri aktívnej infiltrácii je možné vysledovať leukocytózu v dôsledku zvýšenia počtu neutrofilov. V bunkách sa objavuje patologická drvina, ktorá indikuje otravu krvi.

    Centrá rozpadu vedú k poklesu počtu eozinofilov, neutrofilov, mladých foriem, lymfocytov. Keď dôjde k diseminácii, vyskytne sa absolútna monocytóza. Na pozadí resorpcie sa zvyšuje počet lymfocytov a eozinofilov.

    Pri konsolidácii centier nie je hemogram charakterizovaný zmenami.

    Detské testy na tuberkulózu: tuberkulínová diagnóza

    Po dlhú dobu, phisiaisia ​​lekári Mantoux reakcie. Takéto testy na tuberkulózu umožnili zistiť nielen aktívnu infekciu, ale aj infekciu. Podstatou vzorky bola subkutánna injekcia tuberkulínu - látka, ktorá spôsobila alergizáciu tela. Materiál z cesta získaný z Micobacterium Bovis. Po subkutánnej injekcii sa získa papula, ktorá odráža odpoveď organizmu na prenikanie mykobaktérií:

    1. Normálna papula - veľkosť od 5 do 16 mm;
    2. V neprítomnosti reakcie - oslabenie imunitného systému, absencia mykobaktérií;
    3. Veľké papule - prítomnosť bakteriálnych antigénov, kontakt s nosičom tuberkulóznych bacilov.

    Metóda sa nepovažuje za spoľahlivú vzhľadom na veľký počet falošne pozitívnych reakcií. Pri pochybných výsledkoch sa vyžaduje potvrdenie PCR. S príchodom diaskintestu (dst) sa situácia zmenila. Kombinované použitie metód umožňuje získať spoľahlivejšie výsledky.

    Klasické "fytiologické" metódy diagnostiky tuberkulózy

    Lekári pre diagnostiku tuberkulózy u detí a dospelých používajú tieto testy:

    • Štúdium anamnézy pacienta (kontakt s pacientom alebo nosičom tubulárneho bacilu). Identifikácia sociálnych rizikových faktorov pomáha naznačiť možnú infekciu;
    • Stanovenie citlivosti tuberkulínu (Mantoux test) s PPD tuberkulínom v dávke 5-10 TE. Vyhodnotenie výsledku sa uskutoční v priebehu 48-72 hodín;
    • Röntgenové vyšetrenie sa vykonáva u detí a dospelých s podozrením na tuberkulózu, ohyb tuberkulínových testov;
    • Bakteriologická kultúra je nezvratným dôkazom infekcie spôsobenej Mycobacterium tuberculosis. Pri správnom odbere spúta, detekcii patogénu v oplachu žalúdka sa môžu testy na tuberkulózu považovať za pozitívne. Kochov prútik sa nachádza v hnisavých abscesoch, lymfatických uzlinách, ascitickom výpotku, pleurálnom výpotku, moči, mozgovomiechovom moku;
    • Rýchlosť sedimentácie erytrocytov sa zvyšuje s každou infekciou, vrátane tuberkulózy;
    • PCR umožňuje identifikovať špecifický patogén, ale štúdia je drahá;
    • Diaskintest určuje pľúcnu tuberkulózu, ale často dáva negatívne výsledky v extrapulmonálnej lokalizácii infekcie.

    Moderná diagnostika tuberkulózy s použitím komplexu metód umožňuje stanoviť mykobaktérie v tele s vysokým stupňom spoľahlivosti. Pomocou existujúcich metód sa zistí aktívny proces alebo infekcia. Potrebujeme len čas na kontaktovanie odborníkov!